内 容 提 要

本书是一部专门介绍抗衰老研究实验方法的专著，

详细地介绍了目前国内外各种常用的抗衰老实验方法。

全书共分为十章，主要包括衰老动物模型的制作以及与

衰老密切相关的神经、内分泌、免疫、自由基、血糖血

脂代谢。核酸蛋白质代谢 微量元素、寿命试验、抗应

激试验等方面，有关章节还附有应用实例，以便读者掌

握运用。本书读者对象为：医药科研人员、大专院校师

生、老年医学工作者、中西医结合研究人员以及药厂

保健品厂科技人员，尤其适用于从事抗衰老新药 保健

品研究开发的研究人员使用 是一本很有实用价值的参

考书。

目 录

第1章 衰老动物模型

1.1肾虚衰老模型

1.2脾虚衰老模型

1.3阴虚衰老模型

1.4阳虚衰老模型

1.5血虚衰老模型

1.6血瘀衰老模型

1.7亚急性衰老模型

1.8Os损伤衰老模型

1.9去胸腺衰老模型

1.10自然衰老模型

第2章 寿命试验研究方法

2.1果蝇寿命试验法

2.2家蝇寿命试验法

2.3家蚕寿命试验法

2.4隆腺溞寿命试验法

2.5小鼠寿命试验法

2.6大鼠寿命试验法

2.7人二倍体培养细胞寿命试验法

第3章 神经衰老研究方法

3.1学习记忆实验方法

3.2胆碱能神经递质测定方法

3.3γ－氨基丁酸能神经递质测定方法

3.4单胺类神经递质测定方法

3.5儿茶酚胺的合成与分解酶活性测定方法

3.6中枢递质受体的测定方法

3.7内啡肽的含量测定方法

第4章 内分泌衰老研究方法

4.1性激素功能实验方法

4.2垂体激素的测定方法

4.3性激素的测定方法

4.4甲状腺激素的测定方法

4.5肾上腺皮质激素的测定方法

4.6胰岛素的测定方法

RIA法

4.7胰高糖素的测定方法

RIA法

4.8肾上腺重量法

4.9肾上腺内抗坏血酸含量的测定方法

2，4－二硝基苯肼比色法

高效液相色谱法

4.10激素受体的测定方法

第5章 免疫衰老研究方法

5.1免疫功能低下模型的制备法

5.2非特异免疫功能测定方法

5.3体液免疫功能测定方法

5.4细胞免疫功能测定方法

5.5红细胞免疫功能的测定方法

红细胞C3b受体花环试验法

红细胞免疫复合物花环试验法

第6章 自由基与衰老研究方法

6.1超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定

方法

化学发光法

碱性二甲基亚砜－鲁米诺化学发光法

甲月替比色法

肾上腺素法

NBT还原法

邻苯三酚法

6.2超氧化物歧化酶同工酶活性的测定方法

亚硝酸盐法（CuZn－SOD Mn－SOD）

化学发光免疫法（CuZn－SOD）

6.3过氧化氢酶（CAT）活性的测定方法

极谱氧电极法

化学发光法

铬酸醋酸钾比色法

紫外分光光度法

过硼酸盐滴定法

6.4过氧化物酶（POD）活性的测定方法

愈创木酚比色法（I法）

愈创木酚比色法（Ⅱ法）

DAB比色法

6.5谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活性

的测定方法

DTNB直接比色法

NADPH比色法

RP—HPLC法

6.6谷胱甘肽还原酶（GR）活性的测定方法

6.7总谷胱甘肽含量的测定方法

循环法

荧光法

6.8氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量测定方法

DTNB比色法

6.9还原型谷胱甘肽（GSH）含量测定方法

荧光法

6.10过氧化脂质（LPO）含量测定方法

TBA荧光法（I法）

TBA荧光法（Ⅱ法）

TBA比色法

组织匀浆MDA比色法（体外法）

反相离子对色谱法

6.11血清脂质过氧化氢含量测定方法

比色法

6.12脂褐素（LF）含量测定方法

荧光法

组织化学法

6.13自由基浓度的测定方法

电子自旋共振法

高效液相电化学检测法

化学发光法

第7章 血糖血脂代谢与衰老研究方法

7.1血糖测定方法

邻甲苯胺法

超微量邻甲苯胺法

葡萄糖氧化酶法

福林（F01in）－吴氏法

化学发光法

蒽酮法

TBA比色法

7.2血脂测定方法

第8章 核酸蛋白质代谢与衰老研究方法

8.1核酸与蛋白质合成代谢的放射性前体物

质掺入测定方法

放射性同位素掺入法

显微放射自显影法

8.2DNA、RNA含量测定方法

二苯胺法

苔黑酚法

定磷法

双波长分光光度法

8.3RNA聚合酶体外转录活性的测定方法

3H—UTP掺入法

8.4DNA损伤与修复功能的测定方法

3H—MNU掺入法

FADU法

3H—TdR掺入法

3H 14C双标记法

8.5姊妹染色单体互换（SCE）的测定方法

姬姆萨染色法

8.6环核苷酸的测定方法

8.7钠、钾－三磷酸腺苷酶（Na＋、K＋－ATF酶）

活性的测定

定磷法

化学发光法

8.8蛋白质含量测定方法

Lowry法

双缩脲法

Coomassic亮蓝法

8.9结缔组织中胶原蛋白的测定方法

8.10铜蓝蛋白 （CP） 的测定方法

联大茴香胺法

TMB比色法

RIA法

第9章 微量元素与衰老研究方法

9.1锌的含量测定方法

吡啶偶氮酚类比色法

电位溶出法

火焰原子吸收光谱法

9.2硒的含量测定方法

荧光法

石墨炉原子吸收光谱法

气相色谱法

新极谱法

9.3铜的含量测定方法

TMPYP比色法

二乙基二硫代氨基甲酸钠比色法

DiBr－PAESA比色法

荧光法

石墨炉原子吸收光谱法

9.4铁的含量测定方法

氨基安替吡啉比色法

吡啶偶氮酚类比色法

亚铁嗪法

石墨炉原子吸收光谱法

9.5铬的含量测定方法

石墨炉原子吸收光谱法

二苯碳酰二肼比色法

阳极溶出伏安法

9.6锰的含量测定方法

石墨炉原子吸收光谱法

甲醛肟比色法

水杨醛肟比色法

火焰原子吸收光谱法

9.7钙的含量测定方法

邻甲酚酞络合酮比色法

甲基麝香草酚蓝比色法 ?

火焰原子吸收光谱法

9.8磷的含量测定方法

氯化亚锡磷钼蓝比色法

紫外分光光度法

9.9镁的含量测定方法

甲基麝香草酚蓝比色法

钦黄比色法

荧光法

9.10碘的含量测定方法

硫氰酸钾比色法

湿消化法

气相色谱法

9.11氟的含量测定方法

格式作图法

9.12钒的含量测定方法

极谱催化法

分光光度法

9.13镍的含量测定方法

a－糠偶酰二肟比色法

示波极谱法

9.14钴的含量测定方法

吡啶偶氮酚类比色法

9.15铝的含量测定方法

冷消化硫氰酸盐比色法

9.16铝的含量测定方法

铬天青S比色法

铬天青B比色法

9.17铅的含量测定方法

极谱催化法

原子吸收光谱法

9.18镉的含量测定方法

阳极溶出伏安法

石墨炉原子吸收光谱法

9.19砷的含量测定方法

孔雀绿比色法

9.20汞的含量测定方法

冷消化法

9.21样品中多种微量元素的连续测定方法

示波极谱法

荧光－原子吸收光谱法

第10章 抗应激试验及其他

10.1抗应激试验方法

10.2体重增长试验法

10.3前列腺素及其代谢产物的测定方法

10.4血液流变学实验方法

10.5抗凝血实验方法

10.6微循环实验方法

附录一 抗衰老药物的药效学研究规范

附录二 抗衰老药物临床研究指导原则

附录三 新药（中药）治疗老年病临床研究指导

原则

【观察指标】

（1）外观特征 肾虚动物一般可见精神萎靡、少动、骑

跨、交配时间缩短或减少、瘦弱、毛色干枯乏泽、食量减少

等症状。

（2）生殖腺重量指数测定 实验结束后处死动物，取睾

丸、精囊腺、前列腺、包皮腺、提肛肌及肾上腺称重，计算

脏器重量指数。

（3）全血淋巴细胞转化试验 以3H－TdR掺入法测定

淋巴细胞转化率，反映肾虚动物免疫状态。

（4）血浆睾酮及皮质醇含量测定 借以反映肾虚动物内

分泌功能状态

（5）其他 根据实验目的要求加以选择，如SOD、

LPO、MAO－B等指标。

1.1.2慢性悬吊应激型肾虚模型［7～9］

【原理】性功能低下是肾虚的重要特征之一。正常成年

小鼠长期处于应激状态下，可引起神经内分泌系统功能性紊

乱，再加上频繁交配，久之可出现类似肾虚的表现。

【操作方法】取2～3月龄的IVCS种或NIH纯系雄

性小鼠，随机分为空白对照组、吊应激对照组及吊应激药物

组。药物组每日每鼠给予一定剂量的药液，对照组则同途径

给予等体积生理盐水，连续给药10天，实验开始时，将小鼠

悬吊于水槽壁上端（临近水面），下为16℃～22℃水池，使

小鼠始终处于强迫性抬头、挣扎状态。每日悬吊30min， 连

续10天。于每次悬吊应激前，将小鼠按雌：雄＝2：1合笼15

min，在安静的暗室内观察合笼时间内的潜伏期（从合笼到

第一次骑跨或交配的间隔时间）、骑跨次数、交配次数等。雌

性小鼠连日皮GH 注射己烯雌酚1mg/kg，直至实验结束。实验

开始3天后，连日皮下注射黄体酮10mg/kg。每晨作阴道涂

片，观察性周期。最后一次应激后24h处死动物，作睾丸、

前列腺、精囊腺和肾上腺重量指数及性激素含量测定。比较

各组间的差异，作统计学处理。

【举例】衡法Ⅱ号对慢性应激负荷雄性小鼠性功能的影

响 将40只雄性小鼠随机分为四组，每组10只。正常对照组

（饲生理盐水）、吊应激组（饲生理盐水）、吊应激十衡法Ⅱ

号I组（2.5g/kg）、吊应激十衡法II号Ⅱ组（15g/kg）。将药

物分别溶于饮水中，采取自饮药法，共23天。结果表明吊应

激组小鼠交配次数明显低于正常对照组（P＜0.01），而给药

组中，除I组骑跨次数无明显差异外，与吊应激组、正常对

照组比较，其它给药组潜伏期、骑跨与交配次数指标均有明

显增加，提示衡法II号具有改善小鼠性功能的作用。

1.1.3阉割型肾虚模型［10］

【原理】中医学认为，人的生、长、壮、老、已生命过

程与肾关系密切。人至老年，多为生理性肾虚，男性往往表

现行阳虚、性机能衰退，女性则多为肾虚缺血、内分泌机能

紊乱等，使全身脏腑机能明显减退，呈现一派衰老征象，其

中老年人性机能衰减和性器官萎缩是衰老的主要标志之一。

采用手术阉割雄性鸡的睾丸一段时间后，即可造成类似人类

肾虚衰老动物模型，而补肾中药可以改善肾虚衰老动物的某

些病理指标。