目 录

实验室规则

第1章 生化实验基本操作

1.1 玻璃仪器的洗涤与清洁

1.2 清洗液的原理与配制

1.3 吸量管的种类和使用

1.4 溶液的混匀

1.5 过滤

1.6 离心机的使用方法

第2章 实验样品的制备

2.1 血液样品

2.2 尿液样品

2.3 组织样品

第3章 分光光度法

3.1 分光光度法

3.2 分光光度法在生物化学中的应用

3.3 分光光度计的结构

实验1 紫外光度法测定蛋白质含量

实验2 改良Lowry氏法测定蛋白质含量

实验3 双缩脲（Biuret）法测定蛋白质含量

实验4 动物组织中基因DNA 的提取

实验5 肝组织核酸的提取和鉴定

实验6 酵母细胞核酸的提取和组分鉴定

实验7 5’－腺苷酸酶活性测定

实验8 酵母细胞核酸的定量测定（定磷法）

实验9 改良Mohum法测定血清谷－丙转氨酶活性

实验10 血清无机磷的定量测定

实验11 过氧化脂质测定

实验12 酵母利用无机磷的测定

第4章 层析法

4.1 分类

4.2 层析中的常用术语

4.3 纸层析

4.4 薄层层析

4.5 离子交换层析

4.6 凝胶层析

4.7 亲和层析

实验13 血清脂类硅胶G薄层层析

实验14 氨基酸的薄层层析

实验15 氨基酸单向纸层析

实验16 聚酰胺薄膜层析鉴定成人型血红蛋白N－末端氨基酸

实验17 葡聚糖凝胶SephadexG－50柱层析分离脲酶－胰岛素混合液

实验18 葡聚糖凝胶SephadexG－50柱层析分离血红蛋白和DNP－胰糜蛋白酶

混合液

实验19 血清γ－球蛋白的分离纯化

实验20 凝胶层析分离血红蛋白与鱼精蛋白

实验21 离子交换层析分离混合氨基酸

第5章 电泳法

5.1 电泳的基本原理

5.2 影响电泳的主要因素

5.3 区带电泳的分类

5.4 几种常见的电泳方法

实验22 血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳定量测定

实验23 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳——盘状电泳

实验24 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

实验25 碱性磷酸酶（AKP）同工酶的分离与测定

实验26 乳酸脱氢酶同工酶的分离与测定

实验27 等电聚焦电泳分离血红蛋白

第6章 离心分离技术

6.1 原理

6.2 分类

实验28 细胞核分离和核酸、蛋白质含量测定

第7章 蛋白质、酶、核酸

实验29 蛋白质的沉淀反应

实验30 酪蛋白等电点的测定

实验31 凯氏微量定氮法

实验32 酪氨酸酶的催化作用

实验33 影响酶促反应的因素

实验34 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制

实验35 蔗糖酶的专一性

实验36 碱性磷酸酶的提取和比活性测定

实验37 碱性磷酸酶米氏常数的测定

实验38 过氧化氢酶Km的测定

实验39 酵母蔗糖酶Km值的测定

第8章 临床生化实验

实验40 邻甲苯胺法测定血糖

实验41 饥饿和饱食对肝糖原含量的影响

实验42 胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响

实验43 血清甘油三酯含量测定

实验44 血清总胆固醇含量测定

实验45 高密度脂蛋白中胆固醇含量的测定

实验46 草酸盐－高锰酸钾滴定法测定血清钙

实验47 二乙酰一肟显色法测定尿素氮

实验48 食物中维生素C的提取和定量

附 录

一、待测溶液和选用滤光片的对应关系

二、化学试剂纯度分级表

三、实验室常用酸碱的比重和浓度

四、不同温度时标准缓冲溶液的pH值

五、缓冲溶液的配制

六、离心机转速与离心力的换算

七、元素原子量表

八、硫酸铵饱和度常用表

九、紫外吸收法测定蛋白质含量的校正因子

十、单位换算

第1章 生化实验基本操作

1.1 玻璃仪器的洗涤与清洁

生化实验常用各种玻璃仪器，其清洁程度将直接影响测量样品的可靠性和反应的准确

性。因此，玻璃仪器的清洁不仅是实验前后的常规工作，而且是一项重要的基本技术。

洗涤的玻璃仪器要求清洁透明，玻璃表面不含可溶解的物质。水沿器壁自然下流时不挂

水珠。

玻璃仪器的清洗方法很多，需要根据实验的要求，以及污物性质选用不同的清洁方法。

1.1.1新购仪器的清洗

新购仪器表面附着油污和灰尘，特别是附着有可游离的金属离子。因此，新购仪器需要

用肥皂水刷洗，流水冲净后，浸于10％Na2CO3溶液中煮沸。用流水冲净后，再浸泡于1％—

2％HCl溶液中过夜。流水洗净酸液，用蒸溜水少量多次冲洗后，干燥备用。

1.1.2使用过的玻璃仪器的清洗

1.1.2.1一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如试管、烧杯、量筒等先用肥皂水刷洗，再

用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2—3次后，倒置于清洁处晾干。

1.1.2.2 容量分析仪器，如吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，沥干后，浸于

铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水和蒸馏水冲洗干净，干燥备用。

1.1.2.3比色杯，用毕立即用自来水反复冲洗，如有污物粘附于杯壁，宜用盐酸或适当溶

剂清洗。然后用自来水、蒸馏水冲洗干净。切忌用刷子、粗糙的布或滤纸等擦试。洗净后，

倒置晾干备用。

1.2 清洗液的原理与配制

1.2.1铬酸洗液

广泛用于玻璃仪器的洗涤，其清洁效力来自于它的强氧化性和强酸性。由重铬酸钾

（K2Cr2O7）和浓硫酸配制而成。

硫酸越浓，铬酐越多，其清洁效力越强。因洗液具有强腐蚀性，所以使用时，必须注意

安全。当洗液由综红色变为绿色时，不宜再用。

配制时有下列三种方法：

（1）常用铬酸洗液，浓度为3％—5％。配制方法如下：称取重铬酸钾5g置250ml烧杯

之中，加入热水5ml搅拌，为使其尽量溶解，在烧杯下放一石棉网，向烧杯中缓慢注人工业

用浓硫酸100ml，随加随搅拌，注意不要溅出来。因为放热较多，H2SO4不宜加入过快。此

时溶液由红黄色变为黑褐色。冷却后装瓶备用。盖严以防吸水。

（2）取100ml工业用浓硫酸置烧杯中，小心加热，然后慢慢加入5g重铬酸钾粉，边加

边搅，待全部溶解后冷却，贮于具塞的细口瓶中。

（3）取80g重铬酸钾溶于1000ml水中，慢慢加入工业用硫酸，边加边搅，冷却后备用。

1.2.2肥皂水和洗衣粉溶液

这是最常用的洗涤剂，主要是利用其乳化作用以除去污垢，一般玻璃仪器均可用其刷

洗。

1.2.3 5％Na3PO4·12H2O水溶液

碱性，可用于洗涤油污。所洗仪器不可用于磷的测定。

1.2.4乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠）洗液

浓度为5％—10％的EDTA二钠洗液，加热煮沸，可去除玻璃器皿内部钙镁盐类的白色

沉淀和不易溶解的重金属盐类。

1.2.5尿素洗液

45％的尿素溶液是清洗血污和蛋白质的良好溶剂。

1.2.6草酸洗液

称取5—1Og草酸，溶于100ml水中，加入少量硫酸或浓盐酸，可洗脱高锰酸钾的痕迹。

1.2.7盐酸－乙醇洗液

3％的盐酸－乙醇可以除去玻璃器皿上的染料附着物。

1.2.8乙醇－硝酸混合液

用于清洗一般方法难于洗净的有机物。最适合于洗净滴定管。